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篇一:《正交试验优选昆布中褐藻酸的提取工艺》
正交试验优选昆布中褐藻酸的提取工艺
（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）
【摘要】 目的 优选昆布中褐藻酸的最佳提取工艺。方法 采用正交设计L9(34),考察溶剂量、提取时间、提取温度对褐藻酸含量和得率的影响,并进行方法学考察。结果 最佳制备工艺为A1B1C2,即药材加入30倍量1%Na2CO3溶液,60 ℃搅拌提取1 h。结论 提取温度为最重要的影响因素,高于60 ℃时褐藻酸含量会明显下降。优选出的最佳提取工艺是合理的。
【关键词】 昆布；褐藻酸；多糖；正交设计
Optimization of Alginic Acid in Laminaria japonica Aresch by Orthogonal Test LIU Xue-xiang, CHEN Jian-wei Nanjing University of TCM, Nanjing 210029, ChinaAbstract：Objective To optimize the extraction technology of alginic acid in Laminaria japonica Aresch. Methods The influence of the amount of solvent, the extraction time and temperature (3 factors) on the alginic acid content and yield was investigated by orthogonal test L9(34), and carried on to inspect the methodology. Result The optimum
extraction condition was A1B1C2, that was adding 30 times solvent (1%Na2CO3), whisk extracting for one hour at 60 ℃. Conclusion The temperature is the most important factor. The content of alginic acid decrease obviously at above 60 ℃. The optimum extraction technology is reasonable.
Key words：Laminaria japonica Aresch；alginic acid；polysaccharide；orthogonal design
昆布为海带科(Laminariaceae)植物海带Laminaria japonica Aresch.[L.ochotensis Miyabe]的干燥叶状体,含有多糖化合物,其中之一为褐藻酸盐(alginate),系褐藻酸(alginic acid)及其钠、钾、铵、钙盐等,褐藻酸含量为24.3%,最高可达32%。本试验利用间萘二酚与糖醛酸反应呈色,于波长580 nm处有最大吸收的原理,测定构成褐藻酸的糖醛酸的含量,优选昆布中褐藻酸的最佳提取工艺。
1 仪器与试药
752型紫外可见分光光度计(上海第三分析仪器厂产品)；电动搅拌器(江苏省金坛市金城国胜实验仪器厂产品)；UV-2401型紫外分光光度计(日本岛津产品)。昆布购自南京白云亭农贸市场,经本校药学院陈建伟教授鉴定为海带科(Laminariaceae)植物海带Laminaria japonica Aresch.的干燥叶状体；对照品褐藻酸(自制)；间萘二酚(美国Sigma公司,含量99%以上,78H1166)。正戊醇、乙醚、浓硫酸均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 正交试验设计
根据不同制备工艺对昆布中褐藻酸含量的影响,选择溶剂量、提取时间、提取温度作为考察因素,应用L9(34)正交设计表进行试验。因素水平见表1。表1 因素水平表（略）
2.2 褐藻酸得率测定
精密称取干燥剪细的样品2 g,加入1%Na2CO3溶液,按L9(34)正交试验表所列进行搅拌提取。离心,取上清液,加稀盐酸(3→10)搅拌至pH 2.0,析出凝胶,依次用75%、85%、95%乙醇洗涤脱水,得棕色粉末,50 ℃干燥至恒重,取出,置干燥器内冷却至室温,精密称定重量,计算得率[1]。
2.3 褐藻酸含量测定[2]
2.3.1 线性关系考察
精密称取褐藻酸对照品25.1 mg,加入1.25 mL 80%冷至0 ℃的硫酸溶液,放置1 h,待其溶解后,置50 mL量瓶中,加冰水至刻度,摇匀,即得浓度为0.502 mg/mL的褐藻酸标准贮备液。分别精密吸取标准贮备液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mL,置10 mL量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得到浓度分别为5.02、10.04、20.08、30.12、40.16 μg/mL的标准溶液。再分别精密吸取标准溶液2 mL于25 mL具塞比色管中,加入2 mL间萘二酚溶液及2 mL盐酸,振摇混合,将此液在沸水中加热45 min,再在冰水中冷却10 min,向此液中准确加入10 mL乙醚-正戊醇(5∶1)混合液,加盖,激烈振摇混合,分取乙醚-正戊醇层,置752型紫外
可见分光光度计于580 nm处测定吸收度。以浓度(μg)为横坐标,吸收度A为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程：A＝0.006 882X＋0.016 77,r＝0.999 4。结果表明,在10.04～80.32 μg范围内线性关系良好。
2.3.2 稳定性试验
取某一浓度的标准溶液(20.08 μg/mL),精密吸取2 mL,按标准曲线制备法每隔10 min测定1次A值,RSD＝0.27%(n＝7),表明在1 h内溶液是稳定的。
2.3.3 加样回收率试验
取已知含量的1#样品,共5份,每份0.1 g,精密称定,分别加入褐藻酸对照品5 mg,按样品的含量测定方法进行测定,结果平均回收率为96.74%,RSD＝0.85%(n＝5)。
2.3.4 样品含量测定
精密称取样品粉末10 mg,加入2.5 mL 80%冷至0 ℃的硫酸溶液,用玻棒磨碎,放置1 h,待溶解后,加冰水定容于100 mL量瓶中,再精密吸取1 mL,加冰水定容于5 mL量瓶中,吸取2 mL,按”2.3.1”项下方法进行测定,并用外标两点法计算褐藻酸的含量。褐藻提取物昆布。
2.4 正交试验结果
(见表2)表2 昆布中褐藻酸提取工艺正交试验结果（略）注：Y=Y1/Y1×40%+Y2/Y2×60%
2.5 方差分析
(见表3)表3 方差分析（略）注：F1－0.05(2,2)=19,F1－
0.01(2,2)=99
2.6 验证试验
分别称取3份样品,各2 g,按最佳工艺制备方法制备,测定,平均含量为78.68%,RSD＝1.19%(n＝3),表明该工艺稳定可行。 3 讨论
从表3可以看出,方差分析差异无统计学意义。直观分析,从R值看,C因素(即提取温度)为最重要的影响因素；整体看,60 ℃提取样品中褐藻酸的百分含量明显高于其余两水平,且得率较低,而70 ℃提取得率较高,又并未提高样品中褐藻酸的百分含量,说明在70 ℃提取样品杂质含量提高,对提取不利,分析原因可能是褐藻酸在70 ℃以上的高温条件下会有所降解。同时又选择80 ℃制备了3份样品,结果表明,褐藻酸的含量明显下降(含量分别为55.3%、56.8%、56.2%,平均含量为56.1%),故建议在提取酸性多糖褐藻酸时应进行低温提取,避免高温下有效成分的损失。B因素为最次要因素,本着节能的原则,故选择提取1 h。A因素,考虑到节省溶剂,选择30倍量。表2中的综合分是根据样品得率和褐藻酸含量的权重计算得来。
由于药材在溶剂中易膨胀,呈粘稠状,故选择溶剂量比通常的溶剂量要大,这样才能更有效地将有效成分提取出来,且有利于提取液的离心。
褐藻酸的含量测定方法有重量法和容量法[1],但操作步骤
篇二:《昆布》
昆布.txt51自信是永不枯竭的源泉，自信是奔腾不息的波涛，自信是急流奋进的渠道，自信是真正的成功之母。昆 布
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为海带科植物海带Laminaria japonica Aresch.、或翅藻科植物昆布Ecklonia kurome Okam.、裙带菜Undaria pinnatifida（Harv.）Sur. 的叶状体。
味咸，性寒。入肝、胃、肾经。功能：消痰软坚、行水。主治：瘰疬、瘿瘤、噎膈、水肿、睾丸肿痛、带下。内服：煎汤，10～15g；或入丸、散。
【现代研究】
主要成分：海带富含多糖类成分藻胺酸(Laminine，亦称褐藻氨酸、海带氨酸)、藻胶酸(Alginic acid，亦称海藻酸、褐藻酸)、褐藻素（Algin，藻胶
酸的钠盐）、褐藻多糖硫酸酯（PS，其钠盐为藻酸双酯钠，简称PSS）和昆布素(Laminarin，亦称褐藻淀粉、昆布糖、海带淀粉，其硫酸酯为LS)、甘露醇、
无机盐。干品中20％～35％是无机物，水溶性盐中含钾、碘、钙、钴、氟，亦含胡萝卜素、核黄素及维生素、蛋白质、氨基酸等。
昆布含藻胶酸、粗蛋白、甘露醇、灰分、钾、碘。
裙带菜含碘、溴、钙、藻胶酸及多种氨基酸。
药理作用：
1. 对甲状腺的作用 碘是合成甲状腺素的原料，当缺碘时，甲状腺激素的合成减少，甲状腺激素对下丘脑、脑下垂体前叶的反馈作用降低，垂体促甲状腺
激素分泌就增加，引起甲状腺组织增生肿大。昆布中含碘量较高，可纠正机体因缺碘引起的恶性循环，使甲状腺机能恢复正常，腺肿缩小。晚期疗效较差。
2. 对血压的作用 动物实验证明：藻氨酸有降血压作用。藻氨酸单枸橼酸盐给麻醉兔静脉注射，可使血压短暂下降，此作用不被阿托品所阻断；它不
影响闭塞二侧颈总动脉或注射去甲肾上腺素引起的升压反应。藻氨酸单盐酸盐亦有降压作用。
3. 对心脏的作用 昆布浸出液对离体蛙心和兔心有强心作用。昆布基部的乙醚提取物对离体蛙心有兴奋作用；50%甲醇提取物可使离体豚鼠的心房收缩
加强。褐藻淀粉硫酸酯能促进异丙肾上腺素所致家兔心肌损害的修复；对实验性大鼠心肌坏死有保护作用。
4. 对血脂的作用 昆布素硫酸酯（Laminarin sulfate）有降血脂作用。对脂类积聚、结缔组织增生，实验性动脉粥样硬化等均有抑制作用。
5. 对平滑肌的作用 藻氨酸单枸橼酸盐对平滑肌有较显著的抑制作用。并能对抗乙酰胆
碱、5-羟色胺、氯化钡引起的收缩；在离体鼠小肠上，对抗乙
酰胆碱的效力为罂粟碱的0.8％。
6. 镇咳平喘作用 海带根粗提取液对豚鼠有平喘作用（组胺法），对大鼠（二氧化硫法）、猫（电刺激喉上神经法）的咳嗽有一定的镇咳作用。给予
中毒量可使动物运动减少、侧卧甚至昏迷而死亡。
7. 抗肿瘤作用 海藻、昆布及全蝎、蜈蚣等之复方（化癌丹）煎剂给小鼠口服，对艾氏腹水癌有抑制作用。海带热水提取物对小鼠白血病1210
（L1210）有抑制作用。从海带中提取的多糖给小鼠腹腔注射（20mg/kg/d），连续14日，对S180的瘤重有抑制作用，且使小鼠脾重增加；对接种EAC的小鼠
无作用。昆布素对大鼠的网状肉瘤 IRE（腹水型）则无影响。
8. 抗凝血作用 藻胶酸磺酸化后具有抗凝作用。其作用类似肝素，但加热不被破坏。昆布素硫酸酯可以减轻羊水性微循环障碍，使流速加快，红细胞
聚集减少，凝血时间延长。
【临床运用】褐藻提取物昆布。
临床报道：
1. 治疗甲状腺腺瘤 黄药子6g，牡蛎、海藻、昆布各30g，山慈菇、夏枯草、郁金、炮山甲、僵蚕各10g，天花粉12g，玄参15g，金橘叶6g 。水煎服，日1
剂。治疗42例，结果：痊愈 37例，有效5例。〔吉林中医药 1991；（3）：29〕
2. 治疗甲状腺机能亢进症 龙胆草、栀子、柴胡、黄芩各12g，夏枯草、枣仁、麦冬各15g，昆布、海藻、玄参、生地各21g，甘草6g。随证加减。每日
1剂，水煎2次，分2次服，21剂为1疗程。治疗50例，结果：痊愈15例，基本痊愈17例，有效11例，无效7例。〔陕西中医 1991；12（11）：489〕
3. 治疗梅核气 石菖蒲、砂炒山甲、炒僵蚕、枳实、知母、炒白芥子、海藻各9g，瓦楞子、青黛、川楝子、昆布各15g，食醋750ml 。诸药入醋内煎沸
约20 分钟，去渣取汁，每次10～20ml，每日3次。服药期间，禁食辛辣之品。治疗16例，服药1～3剂全部痊愈。〔河南中医 1990；10（6）：43〕
4. 防治老年性白内障 昆布100g，氯化钠 90g，尼泊金5g，水10000ml 。将昆布用95％乙醇浸泡 24 小时后蒸去乙醇，加入氯化钠、尼泊金后，用热
水溶解至全量，过滤后高压灭菌,制成昆布眼药水。另用维生素B10.2g，维生素B20.02g，维生素C 1g，尼盐合液加至1 000ml，制成三维眼药水。用上述两
种眼药水滴眼，每日各2次。用药后有过敏性结膜炎反应者，可改用脱敏法，即3天点1次，3天后改为2天点1次，以后每天1次，1天后恢复为每天2次。治疗
100例，199只眼，视力改善者占62.3％。〔天津医药 1974；（12）：650〕
方剂选用：
1. 治疗膈气噎塞不下食：昆布（洗净，焙，末）一两，桩杵头细糠一合，共研。用老牛涎一合，生百合汁一合，慢煎入蜜搅成膏，与末杵丸，如芡实大。
每服一丸，含化咽下。（《圣济总录》昆布方）
2. 治疗瘿气初结，咽喉中壅闷，不治即渐渐肿大：槟榔三两，海藻二两（洗去咸），昆布三两（洗去咸水）。上药，捣罗为末，炼蜜和丸，如小弹子
大，常含一丸咽津。（《太平圣惠方》）
3. 治疗气瘿，胸膈满塞，咽喉项颈渐粗：昆布二两（洗去咸汁），通草一两，羊靥二具（炙），海蛤一两（研），马尾海藻一两（洗去咸汁）。上五
味，蜜丸如弹子，细细含咽汁。忌生菜、热面、炙肉、蒜、笋。（《广济方》昆布丸）
配伍效用：
昆布配伍海藻 二者均有软坚散结、清热化痰之功效。但昆布咸寒质滑，消痰散结之力强于海藻，下气最速；海藻苦咸性寒，尚能利水泄热，偏于有形实
证。二药相伍为用，其功效更著，用于治疗瘿瘤、瘰疬因痰邪所致者以及囊肿、乳房胀痛结块、肿瘤等。
【注意事项】
宜忌：脾胃虚寒蕴湿者忌服。
毒副作用：从海带中提取的多糖给小鼠灌胃1000mg/kg，未见毒副反应；给小鼠腹腔注射，半数致死量为158.5±67.0mg/kg。
藻酸双酯钠静脉滴注，多数无不良反应，少数（758例中有23例）出现肢体酸痛、关节肿胀、口舌发麻等，个别出现可复性耳聋。一般不严重，停药后
较快自行恢复。控制药量及静滴速度，一般无副反应。
本品为常用食品，口服其制剂和提取物，一般无毒性反应。
【医家论药】
“昆布，咸能软坚，其性润下，寒能除热散结，故主十二种水肿、瘿瘤聚结气、瘘疮。东垣云：瘿坚如石者，非此不除，正咸能软坚之功也。详其性能
治疗，与海藻大略相同。”（《本草经疏》）
“昆布之性，雄于海藻，噎症恒用之，盖取其去老痰也。”（《本草汇》）
篇三:《有关海带提取物的应用》
海带提取物在化妆品领域的主要应用
a． 海带提取物的来源：褐藻门海带科植物海带（昆布）
b． 活性成分： 1.岩藻黄质
2.海带多糖
活性成分介绍：
A . 岩藻黄质
①性质：属于天然色素类的一种植物有效成分，又被称为褐藻黄素。
②在化妆品领域的应用：
1. 抗皮肤过氧化与延缓衰老
岩藻黄质作为一种氧自由基清除剂,能保护皮肤不受氧自由基过度氧化的影响，可与体内常见的自由基如羟自由基和过氧阴离子自由基等发生反应，防止脂质过氧化，起到祛斑、防皱和抗衰老的功能，从而延长皮肤细胞的寿命,增强其抗氧化的能力。
2. 抑菌
对皮肤上的微生物有很好的抑制作用。能清除皮肤上的灰尘及过多的油脂，营养皮肤，使皮肤持久保持清爽、湿润、弹性及光泽。
各类型化妆品研发：
制成洗剂：可添加至皂、洗手液、洁面乳、洗颜泥、洁面膏、沐浴露、洗发露等。褐藻提取物昆布。
制成护肤品：可添加至保湿水、柔肤水、乳液、精油、凝胶、润肤露、润肤霜、眼霜、面膜、防晒霜等。
其它：可添加至洗发露、漱口液、唇膏等。
③在其他领域的应用：褐藻提取物昆布。
1. 对癌症的化学防治作用，用于抗癌药物的研发。
2. 显著的减肥降脂效果：可作为食品添加剂，制作功能性食品、饮料，可制成减肥膏或按摩膏。又可作为减肥原料药，安
全而无节食痛苦，无副作用。也可用来预防高脂血症。
3. 增强抵抗力的作用：岩藻黄质能有效清除自由基，其抗氧化特性能够显著增强人体增强免疫力。可用作饮食补充剂。
B.海带多糖
①性质：属于天然多糖类的一种植物有效成分。
②在化妆品领域的应用：
1． 护发功能
海带中的多糖成分可以与头发蛋白相结合，形成保湿性的复合物，产生明显的保湿作用，从而能够增强头发的色泽度和柔软度，并减少头发的静电荷。此外，它还促进头发和头皮的新陈代谢，有助于提高头发质量，防止分叉，去除头屑，从而使头发柔润、光泽、富有弹性。
3. 护肤润肤功能
海带多糖是一种优良的润肤剂，这不仅因为海带多糖能与皮肤蛋白结合形成保湿性的凝胶，而且它还可以通过水合作用，在皮肤表面形成保护膜，防止水分蒸发。
4. 抗菌消炎功能
海带多糖对石膏样毛癣菌、石膏样小孢子菌、絮状表皮癣菌和白色念珠菌等皮肤真菌具有一定的抑菌活性。因此配入海带多糖的化妆品具有抗菌消炎、防止皮肤感染和过敏性皮炎等功效，对痤疮、黄褐斑和毛囊炎等常见的面部皮肤病具有良好的治疗效果。
5. 祛斑、防皱和抗衰老功能
海带多糖对自由基具有明显的清除作用（并且呈量效关系），从而起到延缓皮肤衰老的作用。
各类型化妆品研发：
制成洗剂：可添加至皂、洗手液、洁面乳、洗颜泥、洁面膏、沐浴露、洗发露等。
制成护肤品：可添加至保湿水、柔肤水、乳液、精油、凝胶、润肤露、润肤霜、眼霜、面膜、防晒霜等。
其它：可添加至洗发露、漱口液、唇膏、定性剂、整发剂、烫发剂、生发剂等。
③在其他领域的应用：
1.减肥消脂功能：
海带多糖制成的胶囊制剂，能明显降低高脂血症患者血清中TG和Tc的质量分数，同时能升高高脂血症患者高密度脂蛋白与低密度脂蛋白的比值。可作为食品添加剂，制作功能性食品、饮料，又可作为减肥原料药。
2.抗病毒功能
研究表明，海藻多糖对HIV、HSV、囊膜病毒、沙粒病毒、流感病毒、巨细胞病毒、反转录病毒及棒状病毒等多种病毒具
有明显的抑制作用，故可被应用于抗病毒治疗药物当中。
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