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先介绍几个种植农村创业项目：
1、核桃种植项目
核桃是生活当中的一种常见坚果，进入上世纪80年代，伴随着改革开放的春风，以及农村产业结构调整和山区农民兴林致富的渴望，核桃产业发展呈现出蒸蒸日上的大好局面，核桃栽培面积和产量逐年增加。特别是近年来，随着人们对核桃营养价值的认识深入，促使核桃价格一路走高。坚果的平均售价从1990年的8元/公斤，提高到2009年的40元/公斤，提高了4倍。同时，核桃坚果在国际市场上的价格也屡创新高。市场销量呈迅速上升趋势，世界核桃生产、贸易发展的空间较为广阔。由于价格的驱动，市场的魔力一旦释放，便极大地调动了地方政府和广大农民的种植热情，全国核桃产业呈现出空前的发展热潮。
核桃产于华北、西北、西南、华中、华南和华东，新疆南部。分布于中亚、西亚、南亚和欧洲。生于海拔400-1800米之山坡及丘陵地带，中国平原及丘陵地区常见栽培。
中国核桃的分布很广，辽宁、天津、北京、河北、山东、山西、陕西、宁夏、青海、甘肃、新疆、河南、安徽、江苏、湖北、湖南、广西、四川、贵州、云南及西藏等21个省(区、市)都有分布。内蒙古、浙江及福建等省(区)有少量引种或栽培。主要产区在云南、陕西、山西、四川、河北、甘肃、新疆等省(区)。核桃是中国经济树种中分布最广的树种之一。
2、石斛种植项目
野生铁皮石斛属于国家重点保护植物，是禁止采挖的，这就造成大部分石斛植物属于人工培育而成。但是，由于种植户对石斛生长习性的了解，人工种植科学的管理，仿制野生石斛生长环境培育的铁皮石斛拥有和野生石斛一样的成分和功效。由于其药用价值高、生长条件特殊和分布受局限，且经长期人为采挖，野生资源濒临灭绝，因而国内市场供应紧缺，具有很好的种植前景。
铁皮石斛对环境的要求比较严格，选择合适的环境是栽培成功的一半。铁皮石斛应选择在海拔800～1600米左右，湿润冷凉的环境中种植。生长适温15～30℃，生长期以16～21℃更为合适，夜间温度10～13℃，昼夜温差保持10～15℃，最佳无霜期250～300天。年降雨量1000毫米以上。幼苗在10℃以下容易受冻，一般铁皮石斛在5℃以下开始落叶。铁皮石斛的相对湿度保持80％左右较适宜，忌干燥、积水，特别在新芽开始萌发至新根形成时需充足水分。以夏秋遮光70％、冬季遮光30～50％为宜，光照过强茎部会膨大、呈黄色，叶片黄绿色，生长缓慢或停止生长。
铁皮石斛推荐床栽，因为床栽比地栽透水性好，具有苗床中不宜积水造成铁皮石斛根部腐烂，减少蜗牛、蛞蝓、地老虎等地生虫害优点，有利于石斛的健康生长。若考虑长期栽培，栽培基质选择很重要，堆积发酵过的树皮、碎木头及木屑耐腐蚀性，与苔藓、蔗糖渣和腐烂的树叶等相比透气性好，且始终呈半腐熟状态，较适合铁皮石斛栽培使用，是比较理想的栽培基质。
3、猕猴桃种植项目
猕猴桃是多年生木质藤本果树，寿命长，可达40年以上。所以一次性投入，若干年受益，由于一些投入建设材料的寿命在20年左右，而猕猴桃栽植第二年即可开始挂果。随着经济的发展，人们生活水平的提高，对猕猴桃需求量越来越大，而与其他水果的种植面积相比，猕猴桃种植面积相对要小得多，所以选择种植猕猴桃能儿得较好的经济效益。
猕猴桃能加工成果汁、果酒、果晶、果脯、果酱等诸多产品，加工增值潜力巨大。全世界已有30多个国家栽培它，2004年总产100.9万吨，最早和最大出口国是新西兰，其所产鲜果70～80%供出口。到2004年我国只栽培猕猴桃5.8万公顷，产鲜果35万吨，人平仅200多克，根据无法满足鲜食加工之需。
生态和植被良好、海拔50米以上的亚热带和温带地区之丘陵、低山缓坡地最适合猕猴桃商品化栽培，其它地方不能获得丰产、优质或根本不能着果，或不能越冬。这些地方的农民若能抓住机遇高标准建园，可获几十年好效益。现在优质猕猴桃的树下价是每公斤4-6元，上海、北京的售价为每公斤20-24元，深圳2元1个。
4、花卉种植项目
花卉产业除包括常见的花卉，如鲜切花、盆栽花卉、观叶植物、绿化苗木、草坪等产品外，还包括花卉种子和种苗、专用花肥、育花基质、园林机械等辅助产业，以及花卉产品直接的生产、加工、运输、销售及现代农业观光旅游等行业。花卉业是世界各国农业中唯一不受农产品配额限制的产业，近十多年来，世界花卉业以年平均25%的速度增长，远远超过世界经济发展的平均速度，被誉为“朝阳产业”和“黄金产业”，是世界上最具活力的产业之一。世界花卉产业方兴未艾，在21世纪最有发展前途的十大行业中，花卉产业被列为第二位。
5、食用菌种植项目
食用菌是指子实体硕大、可供食用的大型真菌，通称为蘑菇，常见的有香菇、草菇、蘑菇、木耳、银耳、猴头、竹荪、松口蘑（松茸）、口蘑、红菇、灵芝、虫草、松露、百灵和牛肝菌等，从“非典”时期开始之后，人们对绿色无污染食品意识就比较强，所以对食用菌是比较看好的，而且随着人们的生活水平日益提高，人们的认识加强，食用菌对人体各方面的健康作用都很大，是任何药物无法替代的所以市场需求很大。
6、山药种植项目
山药为高产高效经济作物，常年亩产2000-3000公斤，产值5000元，不仅耐贮易运，且可加工增值，外销出口。故山药是当今发展高效农业，促进农民增收的较为理想的推广品种，开发前景极为广阔。近年，我国食品和保健品企业开发了小包装山药精粉，投入市场后颇受消费者的青睐。由于山药用途拓宽，市场对山药的需求量从2006年起每年递增15%以上，年用量由上个世纪50年代的750～1000吨，增长至90年代的6000吨左右，进入21世纪后用量剧增，2009年用量多达30000～40000吨左右。
多肉植物多肉植物因其种类繁多、形状奇特、色彩丰富等特点，开始在国内流行，凭着极其可爱的外形、胖乎乎的肉身、肥厚的叶片、不经意开出的小花、加上能在手中把玩的娇小身躯，越来越受到广大消费者的关注和喜爱，[养殖网:
7、花椒种植项目
花椒树是一种很好的经济树种，适合我国大部分地区种植，现在市场中的花椒价格比较稳定，市场行情也不错，是可以选择的项目。我们中国的市场很庞大，人口众多，加上人们生活水平的提高，花椒作为调料，花椒价格还会上升。花椒还可以进行深加工，作花椒油，这个市场的需求量还是很大的。同时，花椒还是很好的工业原料，可以作肥皂，这一方面只要我们利用起来的话其前景还是可观。花椒还有很高的药用价值，有杀虫的作用，也可以用于保养方面，可以说花椒浑身都是宝。从国外来讲，也有很大的产品出口市场，我国花椒主要出口日本，新加坡、马来西亚，因为花椒是中国特有的，所以从国际市场来说，潜力是很大的。
据调查，以花椒为原料精深加工的调味品市场销路好，花椒及花椒制品在外贸出口上也有一定优势，陕西、四川等地的花椒远销韩国、日本、俄罗斯、美国等国家和地区。花椒除了有食用价值外，在药品、化妆品和许多化工产品生产中都有运用，目前花椒的用途被不断发掘，花椒产业市场前景广阔。
花椒树最主要的经济效益在以下方面：
1、我们中国的市场很庞大，人口众多，加上人们生活水平的提高，花椒作为调料，花椒价格会上升;
2、花椒还可以进行深加工，作花椒油，这个市场的需求量还是很大的;
3、花椒还是很好的工业原料，可以作肥皂，这一方面只要我们利用起来的话，其前景还是可观的;
4、花椒有很高的药用价值。有杀虫的作用。也可以用于保养方面，可以说花椒浑身都是宝;
5、从国外来讲，也有很大的产品出口市场，我国花椒主要出口日本，新加坡、马来西亚，因为花椒是中国特有的。所以从国际市场来说，潜力是很大的，因此花椒的品种选择也是很重要的;
6、进行花椒的深加工，还可以进一步开发花椒的各方面的用途，比如制作花椒精油等。
不过不是所有的地方都适宜种植青花椒，它对于海拔、气候、土壤都有要求，一般在2000以上的高海拔地区生长比较好。
8、薄荷种植项目
薄荷土名叫“银丹草”，为唇形科植物，即同属其他干燥全草，全株青气芳香。叶对生，花小淡紫色，唇形，花后结暗紫棕色的小粒果。多生于山野湿地河旁，根茎横生地下，多生于2100米海拔高度，但也可在3500米海拔上生长，是一种有特种经济价值的芳香作物。中华常用中药之一，辛凉性发汗解热药，治流行性感冒、头疼、目赤、身热、咽喉、牙床肿痛等症，外用可治神经痛、皮肤瘙痒、皮疹和湿疹等，平常以薄荷代茶可清心明目。
薄荷以全草人药，用于治疗风热感冒、头痛、咽喉痛、口舌生疮、风疹、麻疹、胸肋胀闷以及防早孕等，薄荷油、薄荷脑既作为药用，也广泛用作芳香剂、调味剂。因而，种植薄荷市场前景看好，不但在我国市场畅销，而且也是国际市场上的抢手货，以每亩薄荷产薄荷油25千克计算，其纯收人高于种植一般农作物2～3倍。
9、特种蔬菜种植项目
蔬菜是人们日常饮食中必不可少的食物之一，可提供人体所必需的多种维生素和矿物质等营养物质。据国际物质粮农组织1990年统计，人体必需的VC的90%、VA的60%来自蔬菜。此外，蔬菜中还有多种多样的植物化学物质是人们公认的对健康有效的成分，目前果蔬中的营养素可以有效预防慢性、退行性疾病的多种物质，正在被人们研究发现，其种植前景不言而喻。
特种蔬菜更是其中的农村创业项目中的佼佼者。
特种蔬菜主要种类有：
1.西菜
由国外直接引进的品种。如菊苣、结球生菜、西芹、青花菜、球茎茴香、羽衣甘蓝、牛蒡等。
2.新育成品种
是农业科技工作者利用先进育种技术培育出的新品种。如雌性红萝卜、彩色大椒、无刺黄瓜、桔红心白菜等。
3.各地名优品种
是我国某些地区的名、特、优蔬菜品种。如东北雌性红萝卜、莼菜、紫菜薹、豆薯、榨菜、菜心、芥蓝、紫背天葵、节瓜、佛手瓜、心里美萝卜等。
4.野生蔬菜
近年来野生蔬菜重新被人们所瞩目，经过挖掘开发有的成为很好的食用蔬菜。如华北的蕨菜，江苏、湖北的芦蒿，甘肃、内蒙的沙芥，内蒙的口蘑，安徽、江苏的马兰菜以及各地的荠菜、马齿苋、苣荬菜、蒲菜、豆瓣菜等。
5.微型蔬菜
又称袖珍蔬菜，形状小巧玲珑也是近年比较流行的蔬菜品种。如樱桃番茄、樱桃萝卜、迷你黄瓜、指形西葫芦、朝天小辣椒等。这类蔬菜中有直接引进的，也有新培育出的
10、桔梗种植项目
桔梗别名包袱花、铃铛花、僧帽花等，是多年生草本植物，茎高20～120厘米，通常无毛，偶密被短毛，不分枝，极少上部分枝，根可入药，有止咳祛痰、宣肺、排脓等作用。在中国东北地区常被腌制为咸菜，在朝鲜半岛被用来制作泡菜，当地民谣《桔梗谣》所描写的就是这种植物。单凭名称，有人会误以为桔梗乃桔子的梗，但实际上与桔子或柑橘属没有直接关系。
桔梗为多年生草本植物，以根入药，还可以做菜食用，是40种大宗常用中药材之一，具有宣肺、散寒、祛痰、排脓的功效，主治外感咳嗽、咽喉肿痛、胸闷腹胀、支气管炎、胸膜炎等症。调查全国几大药市及产区，国内种植面积逐渐在缩减，而需求量并没有减少，证明桔梗商机再现，发展前景十分看好。
（主持人）这棚架的改进，不但让原来长不出竹荪的地方长满了竹荪，还把竹荪的采收期延长了两个月，两项加在一起，竹荪的亩产提高了30%。吴勇还改进了另一项技术，也提高了种植户的效益，不过不是靠增加产量，而是能节省成本。
这项节省成本的技术，就是用玉米秸秆替代木材作竹荪的栽培材料。
（采访）贵州省织金县绮陌乡中营村种植户吴康：“木材每斤一毛，秸秆每斤两分，一斤便宜了八分钱。”
一斤玉米秸秆比一斤木材便宜８分钱，听起来还不大惊人，可是，知道每亩竹荪的木材需要量是多少吗？
（采访）贵州省织金县绮陌乡中营村种植户吴康：“一亩地要用木材六七千斤。”
一斤木材一毛钱，六七千斤木材，那就是六七百块呀！为什么种竹荪需要那么多的木材呢？这主要和它的栽培方式有关。
以前用木材栽培竹荪，都是把阔叶木砍成宽两三厘米，长ba九厘米的木条，经过消毒和水煮，再把这些木条紧密地平铺起来，形成一个宽三四十厘米的平面，然后再在木材上放好菌种，覆土，浇水。也就是说，整个地块要铺满木材，算下来，一亩就需要六七千斤木材。
吴勇说，如果用玉米秸秆代替木材的技术，每亩所需要的秸秆和木材总量是差不多的，也是六七千斤，但玉米秸秆是每斤2分钱，一亩地最多也就是花个200块钱，也就是说，每亩能省下500多块呢！
吴勇是怎么想到用玉米秸秆来替代木材呢？原来，竹荪和其它栽培较多的食用菌相比，有一个特殊的习性。
（采访）贵州省织金县竹荪研究所所长吴勇：“因为食用菌分两种，一种是木腐性的，一种是草腐性的，而竹荪是杂食性
我们常见的食用菌，主要是靠分解植物的组织并从中吸取营养来生长的，目前栽培比较多的几十种食用菌，从习性上大致可以分成两大类，一种是只能分解草类，并从中吸取营养的草腐性食用菌，如，草菇、双孢蘑菇等；另外一种是只能分解木材并从中获取营养的木腐性食用菌，如，香菇、木耳、平菇等。而竹荪是比较特别的一类，它既能从木质中吸收营养，也能从草类中获取养分，也就说，它是杂食性的。
近些年，很多种植户向吴勇反应，木材越来越难买，吴勇也就根据竹荪的杂食性特征，在很多材料上进行接种试验，来寻找木材的替代品，最后发现，玉米秸秆的效果最好。
（采访）贵州省织金县竹荪研究所所长吴勇：作物秸秆，尤其是玉米秸秆，蛋白质和糖分比木材多得多，进行了很多试验，最好就是玉米秸秆。”
确定了玉米秸秆来替代木材，吴勇又经过了一段时间的试验，总结出了具体的栽培技术要点。用玉米秸秆栽培竹荪，关键要注意两个问题，第一，玉米秸秆的质量要好。
（纪实）吴勇教吴康怎么用玉米秸秆
（采访）贵州省织金县竹荪研究所所长吴勇：“在秋收以后，用干燥的秸秆不能用霉变的，把秸秆砍成40厘米宽。”
选好了秸秆，铺设的方法也很重要。
（采访）贵州省织金县竹荪研究所所长吴勇：“因为是草所以要跟紧密些，要反复的浇水，如果水分不够，就长不出菌丝。”
玉米秸秆一定要比木材铺得更紧密，更瓷实，尽量不要留空隙，换句话说，就是要在单位面积里铺上尽量多的秸秆，因为它们腐烂得很快，如果秸秆数量不够，到了生长后期，菌丝的营养就会跟不上，从而影响竹荪的生长。
因为秸秆的腐烂速度快，就秸秆必须每年都重铺，不像铺木材，是两年铺一次。这虽然有点麻烦，但可以带来一个大好处，因为玉米秸秆腐烂快，营养转化快的特点，使用木材两年才能达到的产量，玉米秸秆一年就达到了，
（采访）贵州省织金县竹荪研究所所长吴勇：“周期快，木材两年总产量100公斤干的，秸秆一年就转化完了，并且节省了人力和物力，主要原因就是秸秆腐烂的快，营养转化快。”
使用玉米秸秆以后，原本两年才能达到的产量，现在一年就实现了，生产周期缩短了一半，效益也就相应的增加了一倍，更重要的是种植户们终于找到了来源广泛，价格低廉的栽培材料。
（主持人）您想呢，一斤一毛钱的木材换成了一斤两分钱的玉米秸秆，这省了多少钱呢，更重要的是，以后种竹荪不用木材了，也为保护生态环境出了大力。吴勇还有一手呢，这个新技术可是解决了竹荪保鲜上的一个大难题。
（纪实）林秀收竹蛋
每年的九月份，正是织金县的竹荪大量采收、上市的时候，可是，这采下来的，并不是展开美丽菌裙的竹荪，而是这种还没打开菌盖的圆圆的竹蛋。论长相，这竹蛋可比竹荪差远了，可是经销商们还偏爱收竹蛋。
（采访）贵州省织金县竹荪经销商林秀：“水分可以，这个小了一点，经我手销出去的干的有上百吨，竹蛋有四五百吨，比干的比重大一些。”
这貌不惊人的竹蛋为什么比干竹荪还欢迎呢？这还得从吴勇在几年前的一个偶然发现说起。
（采访）贵州省织金县竹荪研究所所长吴勇：“刚开始的时候就是无意给绊倒了，以为损失了，可是过了几天就长出来了。”
吴勇发现，这竹荪跟其它食用菌都不一样，在菌盖没有打开之前，竹荪就藏在竹蛋里面，当竹蛋成熟的时候，只要温度保持在18摄氏度以上，有充足的水分，就会很快长成一株完整的竹荪来，更神奇的是，当竹蛋在短时间里长成竹荪的时候，它的重量并不会减少。
（采访）贵州省织金县竹荪研究所所长吴勇
“我们做个实验，这个竹蛋已经长成了，这菌盖里就是竹荪，在几个小时里就能长成一个竹荪。
自从发现了竹蛋的秘密，吴勇就想到把它运用到竹荪的保鲜运输上，因为之前运送鲜竹荪时，都是用加冰的办法，可效果并不理想。
（采访）贵州省织金县竹荪经销商林秀：“开始使用放冰的方法，可是竹荪的裙子会破碎，会有腐烂，对方说能不能再好一点。”
因为竹荪的裙子很脆，稍不注意就会破碎、甚至腐烂，用冰来保鲜的方法，不仅费用高昂而且效果不大。
而现在，把成熟的竹蛋摘下来运输，等到了目的地，在把竹蛋往水里一放，竹荪就完整地长出来，这样，竹荪在运输中就不会损失，保证了好的商品外观。当然，判断竹蛋什么时候可以采摘还是有讲究的。
（采访）这个成熟的竹蛋顶部要突起，用手压很瓷实。
（纪实）竹荪长大
（采访）贵州省织金县竹荪经销商林秀：“现在，我的客户80%都是要鲜竹蛋的。”
织金县的竹荪，历经几十年的发展，实现了从野生到人工栽培，从低产量到高效益的跨越，织金县也成了我国优质竹荪的重要产区。
（采访）贵州省织金县副县长安太敏：“竹荪已经成为织金县的特色产业，已经成了支持地方发展的支柱产业。”
（主持人）改变棚架，竹荪的产量增加，用玉米秸秆代替阔叶木，种植的成本减少了一半还要多，发现了竹蛋的秘密，让新鲜的竹荪开始走上外地的餐桌，竹荪种植和保鲜技术每一次进步，都能让我们感受到农民的喜悦和科技的力量。
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食用菌学报 2005.12(2):41~46 ActaEdulisFungi
文章编号:1005-9873(2005)02-0041-06
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Co-C辐照对草菇生理生化指标及保鲜效果的影响
谢福泉1,谢宝贵2,林远崇1,羿 红1,付瑞洲1
(福建省蚕桑研究所食药用菌研究室,福州350003;
21
福建农林大学生命科学学院,福州350002)
摘 要:草菇子实体经不同剂量60Co-C射线辐照后,置于16e、无光照的生化培养箱中贮藏6d。结果表明,0.4kGy剂量辐照对草菇的保鲜效果最好。对不同剂量处理的草菇进行生理生化分析表明,其蛋氨酸含量、呼吸强度等指标均明显低于对照;粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、氨基酸总量等指标与对照差异不大。
关键词:草菇;
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Co-C;保鲜;生理生化指标
中图分类号:S646.130.1;S124.2 文献标识码:A
草菇(Volvariellavolvacea)是我国主要出口创汇菇种之一,其鲜菇肥嫩脆滑,鲜美爽口,不仅营养丰富,且在保健、医疗等方面亦有巨大的应用价值。然而,草菇的种性决定了其生长季节只能在炎热的夏季,生长发育速度极快,采后3~5h就开伞,失去商品价值。低温贮藏(0~5e)是保鲜蘑菇、香菇等菇类较有效的方法之一,但不适用于保藏鲜草菇,因其子实体组织细嫩,极易发生冻害,导致/液化出水0[1]。因此,草菇保鲜问题成为制约草菇生产的核心问题。我们采用Co-C射线辐照处理技术结合温度和自发气调的贮藏方式,对草菇贮藏保鲜效果及其生理生化指标进行了研究,以期为草菇贮藏保鲜提供理论指导。
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1 材料与方法
1.1 材料处理
供试草菇于清晨采自福建省福州市新店草菇栽培专业户。蛋形期标准挑选合格的子实体[2]。草菇采摘后用0.08mm聚乙烯薄膜袋敞口包装,送至福建省农科院稻麦所辐照中心,采用0.0kGy(CK)、0.4kGy、0.8kGy、1.2kGy、1.6kGy和2.0kGy6个剂量Co-C射线进行辐照处理,重复3次。辐照后于16e、无光照的生化培养箱中贮藏,观察其保鲜效果,并进行生理生化分析。
1.2 丙二醛(MDA)的提取与含量测定
将不同剂量辐射处理的草菇子实体样品分别切碎混匀,并随机称取20g置于冰冻过的研钵中,加入15mL预冷的50mmol/LpH7.0、内含1%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的磷酸缓冲液(分
收稿日期:2005-04-06原稿;2005-05-10修改稿
基金项目:福建省科技厅资助项目/草菇保鲜技术的研究0(98-z-188)的部分内容
作者简介:谢福泉(1973-),男,1998年毕业于福建农业大学食用菌专业,助理农艺师,主要从事食药用菌种质资源保60
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食 用 菌 学 报 12卷
次加入)研磨成匀浆,于2~4e、14000r/min离心20min,取上清液并测量体积,并贮于4e备用。MDA含量测定参照文献[3]。
1.3 电导率和呼吸强度测定
通过测定草菇子实体外渗液的电导率来判断草菇细胞膜结构与功能受损伤的程度。取贮藏期草菇子实体,用去离子水冲洗2次,滤纸吸干,称重后于20e处理12h。根据菇体重量,每克子实体加去离子水20mL,室温静置4h,测定液体的电导率[2]。
采用吊蓝法测定草菇子实体呼吸强度。用1mol/LBa(OH)2吸收CO2,用0.05mol/L草酸滴定(以上项目在福建农林大学生命科学学院实验室完成)。1.4 营养成分分析
贮藏第6天,将CK、0.4kGy、0.8kGy和1.2kGy4个处理的草菇子实体送至福建省分析测试中心、福建省农科院中心实验室进行粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、氨基酸含量测定(分别采用GB/T14771-1993,GB/T15674-1995,GB5009.10-1985和ZD/T18246-2000),计算并比较测定结果。粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、氨基酸含量计算公式:实际值=测定值@(1-失重率)。1.5 鲜重损失的测定
鲜重损失率=(贮前鲜重-贮后鲜重)/贮前鲜重@100%。1.6 草菇子实体外部形态的综合评定【目前最新草菇保鲜专利】
以目测方式评定贮藏期间草菇子实体的色泽、质地、开伞率、出水液化程度、有无异味等外部形态,口感与风味品质指标由课题组内外人员综合评定。
[2]
2 结果与分析
2.1
Co-C辐照对草菇MDA含量的影响
从图1可看出,对照草菇子实体在测试贮藏期间的MDA含量呈上升趋势,第6天达
60
28.1nmol/g;贮藏早期,辐照处理的草菇MDA含量比对照处理高,但随着贮藏时间的延长,MDA含量升幅不大,几乎维持在同一个水平;第6天时,0.4kGy处理和0.8kGy处理草菇的MDA含量分别是19.8nmol/g和19.2nmol/g,大大低于对照的28.1nmol/g。贮藏第1天,不同剂量辐照处理的草菇MDA含量有差异,且含量随辐照剂量的增大而增加,可能是由于草菇子实体从辐照中心取出回到实验室测定时有一段的时间差,辐照诱发的自由基已引起了膜脂过氧化作用所致。
第2天,各剂量辐照处理草菇的MDA含量均出现了峰值,且峰值随60Co-C辐照剂量加大而增高,以后MDA含量出现回落。我们认为,这是由于辐照处理初期诱发产生的自由基又诱导了膜质中的不饱和脂肪酸发生脂质过氧化的结果。从整个MDA含量变化曲线来看,辐照处理草菇贮藏后期MDA含量的增幅较小,远远低于对照,说明辐照处理在一定范围内能够抑制草菇的膜脂过氧化作用,这一结论与叶蕙[7](2000)的研究结果一致。2.2
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Co-C辐照剂量对草菇膜透性的影响
从图2可看出,随贮藏时间的延长,各处理相对电导率曲线变化趋势没有明显差别,呈先
降后升趋势,草菇膜透性不断增加。辐照处理的草菇在贮藏早期,相对电导率低于对照水平,说明辐照处理在一定程度上保持了草菇膜结构的完整性。
1[2]。
2期 谢福泉等:60 Co-C辐照对草菇生理生化指标及保鲜效果的影响
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2.3
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Co-C辐照剂量对草菇呼吸强度的影响
从图3可看出,各处理草菇在贮藏期间的呼吸强度曲线变化趋势一致。贮藏早期,辐照处理的草菇呼吸强度比对照的大,随着贮藏时间的延长,辐照处理的草菇呼吸强度明显低于对照。采后第2天出现了一个呼吸峰,这可能与果蔬后熟作用有关;菇体经辐照之后,其DNA及酶蛋白受损伤,辐照剂量越大,损伤也越大,在辐照损伤修复之前,需要通过增强呼吸作用获得更多的能量用于损伤修复;当辐照损伤修复以后,辐照处理的草菇呼吸强度明显
低于对照。
图3
60
Co-C辐照对草菇呼吸强度的影响
Fig.3 Effectofirradiationtreatmentwith60Co-CrayontherespirationintensityofV.volvacea
2.4
60
Co-C辐照对草菇粗纤维、粗脂肪、粗蛋白含量的影响
60
从表1可知,贮藏第6天,各处理草菇的粗蛋白、粗纤维、粗脂肪含量与新鲜草菇(未)
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食 用 菌 学 报 12卷
维化进程。
表1
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Co-C辐照处理草菇贮藏6d的粗纤维、粗脂肪、粗蛋白含量
Table1 Thecontentofcrudefiber,crudefatandcrudeproteininV.volvacea
treatedwith60Co-Crayafterpreservationfor6d(%)
处理
Treatment鲜菇Freshfruitbody
CK0.4kGyCo-C0.8kGy60Co-C1.2kGyCo-C
6060
失重率
Weightlessnessrate
0.026.013.714.712.6
粗纤维Crudefiber0.82.000.88440.86300.91270.8910
粗脂肪Crudefat0.05000.06140.05440.08190.0489
粗蛋白Crudeprotein4.02004.07003.56003.95803.7760
表2 不同60Co-C辐照处理草菇的氨基酸含量对比
Table2 ThecomparisonofaminoacidcontentofV.volvaceawithdifferent60Co-Craytreatments(g/100g)氨基酸
Aminoacids
AspThrSerGluProGlyAlaCysValMetIleLeuTyrPheLysTrpHisArg测定值Totalcontent实际值
Conversionvalue
1)
处理Treatments
鲜菇Freshfruitbody
3.40111.55011.47285.42240.41211.23561.60070.25251.71310.39961.95982.57071.04221.57221.8587-1)
CK2.90231.37691.10015.81820.28350.90301.49030.23161.28482.32281.72181.66950.67121.06521.0735-0.39970.830825.145218.6074
0.4kGy3.74121.81961.47889.03190.37921.20221.57960.31331.71370.34801.91442.37750.96551.44141.7367-0.62051.333531.997027.6134
0.8kGy3.32031.72491.24376.71480.34340.92510.59420.18290.93130.20981.25391.77100.61921.20741.3587-0.57621.018223.995020.4677
1.2kGy2.68841.37031.10876.15250.24790.87131.19350.36011.25730.26961.64611.84230.82631.12421.2505-0.46920.985823.664020.6823
0.59811.576228.637928.6379
未测 Notmeasured
60
2.5 Co-C辐照对草菇氨基酸含量的影响
从表2可知,贮藏第6天,对照草菇氨基酸总量为18.6074g/100g,比新鲜草菇减少了35.03%;0.4kGy、0.8kGy及1.2kGy3个剂量辐照处理的草菇氨基酸总量分别比新鲜草菇减
少了3.58%、28.53%和27.78%。说明0.4kGy剂量辐照处理草菇能基本保持其采收时的氨基酸总量。另外,辐照处理草菇的谷氨酸含量明显高于对照和新鲜草菇的谷氨酸含量;辐照处理草菇的蛋氨酸含量则明显低于新鲜草菇,而对照草菇的蛋氨酸含量明显比新鲜草菇高,说明
2期 谢福泉等:60 Co-C辐照对草菇生理生化指标及保鲜效果的影响
45
2.6
60
Co-C辐照对草菇鲜重损失率的影响
从表1可看出,贮藏第6天,对照草菇平均鲜重损失率为26.0%;而辐照处理草菇鲜重损失率明显低于对照,平均鲜重损失率从高到低次序为2.0kGy(16.3%)>0.8kGy>1.6kGy>0.4kGy>1.2kGy。可以断定,辐照处理较好地克服了草菇菇体在贮藏期间的水分散失。2.7
60
Co-C辐照处理草菇子实体外部形态的综合评定
60
比较Co-C辐照处理草菇保鲜效果发现,对照草菇在第2天和第3天几乎全部开伞,第4天开始软化、出水,第5天更软,并产生异味,第6天已腐烂、发霉,不能食用;而经辐照处理的草菇在贮藏期间均未明显开伞,保鲜效果明显好于对照。不同剂量辐照处理间保鲜效果存在明显差异,贮藏第6天,0.4kGy和0.8kGy2个处理的菇体质地良好,商品菇率持在92%以上,其颜色、口感及风味基本不变,保鲜效果最好;其次是1.2kGy处理,一部分质地较好,也有一部分质地较差,出现软化,口感和风味略差;再次是1.6kGy处理,质地软化,颜色变成淡黄色,有部分霉烂;2.0kGy处理最差,不能食用。
3 讨论
3.1 草菇贮藏保鲜是限制草菇生产发展的一大难题。草菇采后保鲜研究长期以来为大家所重视[4~
8]
。辐照保鲜水果和蔬菜的研究已有不少报道[9~
11]
,但将辐照技术应用于食用菌保鲜
则较少见报道。张淑俭等[12]用0.5kGy~1kGy剂量的60Co-C处理蘑菇,有效地抑制了蘑菇开伞。周宗俊(1988)应用60Co-C辐照草菇子实体,降低了开伞率,在15e下可保鲜3~4d[4];叶蕙(2000)研究C辐照对草菇膜透性及其保护酶活性的影响,认为辐照抑制了膜脂过氧化过程,保持了膜结构的完整性,因而延缓了草菇的衰老进程,延长贮藏保鲜期至6d
[7]
。王富民
(1990)研究草菇保鲜温度对保鲜期的影响,结果表明,在15~20e保鲜,开伞率低,出水较少,可保鲜72h,如果贮藏温度低于15e,子实体贮藏48h就大量出水,温度高于25e时,开伞率大幅度提高[5];谢宝贵[2](2003)测定了草菇不同发育阶段、不同贮藏温度下的呼吸作用及膜透性,发现蛋形期草菇膜较稳定,对温度反应迟缓,并在20e时电导率最低,膜破坏程度最小,进而解释了王富民[5](1990)的试验结果。
3.2 笔者从草菇过氧化脂质、膜透性、呼吸强度和营养成分转化等方面研究辐照保鲜草菇的机理,结果表明,辐照处理可以在一定范围内抑制草菇膜脂过氧化作用,从而保持膜结构的完整性,延缓草菇的衰老进程。同时,辐照处理在一定时期内降低了草菇的呼吸强度;在一定程度上抑制了贮藏期间蛋氨酸的形成,从而抑制了内源乙烯的生成量,这与关学雨[11]在莱阳梨上作的研究结果一致。
3.3 草菇低温引起的生化变化已引起人们的重视[13],通过了解其机理,提高草菇的抗寒性,降低细胞膜在低温下的膜透性,实现低温下的草菇保鲜。但这不是单一因素就可改变的问题,其中包括耐低温草菇品种改良等[14,15]。另外,如果能通过诱变或反义基因技术,使草菇在伸长期菌柄生长受阻,就可在常温下保鲜。这些方面的研究工作都有待进一步开展。
参 考 文 献
[1]谢宝贵,吕作舟,江玉姬.食用菌贮藏与加工实用技术[M].北京:中国农业出版社,1994.
[2,.2003,
草菇专辑
专利：CN02138390.1草菇栽培料及其堆制方法及草菇的
栽培方法5专利：CN91104818.9应用农N菌剂生产草菇的新方法3专利：CN95100518.9反季节栽培草菇的方法4专利：CN98121729.X草菇栽培营养素的制配方法4专利：CN99115284.0一种用纯稻草栽培平菇、草菇的方法5“绿威宝植物营养素”在草菇生产上的应用王碧光[1]郑国扬[2]中国食用菌-1997年5期“三温”与草菇产量关系探讨洪立钦杨佩玉江苏食用菌-1991年2期1991年草菇试验研究小结蒋时察蒋玉武江苏食用菌-1992年2期981菌对草菇有显著增产效果林仰河[1]陈秀环[2]福建农业科技-1999年4期CO2浓度对四种食用菌菌丝生长的影响郭家选[1]钟阳和[2]食用菌学报-2001年1期澳大利亚草菇室内栽培技术廖世煌Shuf.,L食用菌-1995年5期巴氏灭菌床栽草菇高产技术王玉华食用菌-1992年3期巴氏消毒法是室内栽培无公害草菇高产稳定的有效措施刘坚真中国食用菌-1994年3期巴氏消毒培养料床栽草菇高产技术阮瑞国闽东农业科技-1994年4期把“三关”抓“两防”夺取草菇丰产冯峥嵘朱钧浙江食用菌-1993年3期百香果园栽培草菇技术及效益叶颜春特种经济动植物-2004年1期半地下式荫棚草菇栽培技术潘宝华李彩萍中国食用菌-1990年3期半熟料框式栽培草菇的增产效果观察鲁浙安浙江食用菌-1991年1期北方草菇复合料高产栽培关键技术万鲁长[1]赵朝海[2]山东蔬菜-2000年2期北方草菇室内栽培技术的探讨周丽鸿胡公洛中国食用菌-1991年5期北方草菇小麦秸秆栽培技术时培盈山东蔬菜-2005年2期北方地区草菇高产优质栽培技术张钧江苏食用菌-1994年6期北
方地区草菇高产栽培技术张钧刘前进中国食用菌-1995年3期北方麦秸栽培草菇高产技术曹建刚陕西农业科学-2003年5期北方塑料拱棚栽培草菇高产技术黄静王云食用菌-2002年2期北方夏季袋栽草菇高产技术李德福朱九军山东蔬菜-2000年B07期变废为宝--广东菇农利用药渣栽培草菇技术关雁桃罗国杨...当代蔬菜-2005年10期薄膜拱棚电加温栽草菇技术陈起实陈起锐食用菌-2000年1期薄膜中棚栽培草菇试验陆月炬食用菌-1997年5期不同培养料栽培草菇试验黄文芳广东农业科学-1994年3期不同培养料栽培银丝草菇试验研究高珠清福建热作科技-2003年4期布袋式覆土栽培草菇试验研究伍国明[1]李梅[1]...中国食用菌-2004年1期蚕豆秸杆种草菇技术杨大林长江蔬菜-2001年12期蚕豆秸秆种草菇关红颖[1]邱宏峰[2]农民致富之友-2006年6期蚕豆秸秆种草菇技术国文农村百事通-2006年6期草姑的果园间套栽培法倪晓燕中国农垦-2001年6期草菇鸡腿菇周年生产栽培技术陶秀娜农民致富之友-2005年5期草菇“巴斯德灭菌”床架式高产栽培新技术郑祥品蔡成琳中国食用菌-1995年1期草菇“二区制”栽培技术周修赵福建农业科技-2004年2期草菇“农大1号”高产栽培技术张保民广西热作科技-2000年4期草菇“农大2号”、“农大3号”的选育、特征特性及栽培要点谢福泉[1]林远崇[1]...福建热作科技-2003年3期草菇V1015驯化栽培初报应国华吕明亮浙江食用菌-1993年3期草菇V—18菌株栽培特性的初步观察曹晋忠朱玫山西农业科学-1990年5期草菇V2菌株引种试验初报李国贤江苏食用菌-1993年1期草菇V35的若干生物学特性及其栽培要点蒋时察江苏食用菌-1992年4期草菇V531的特性及栽培要点
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兴生林衍铨...食用菌-2005年5期草菇冬季栽培技术李宗兰王光辉北京农业-2004年1期草菇多种形式栽培及病害分析丁湖广闽东农业科技-1998年4期草菇二次接种复泥栽培试验胡约民中国食用菌-1989年1期草菇反季节高产栽培技术要点高益猛李赛容中国食用菌-1999年6期草菇反季节栽培的若干问题及解决措施唐海明食用菌-2004年2期草菇反季节栽培技术林丛发丁春林...农技服务-2002年4期草菇反季节栽培新法研究朱坚[1]姜平[2]福建农业科技-2000年4期草菇反季节栽培须重视的几个问题唐海明农家顾问-2004年6期草菇废料栽培金针培金针菇的研究陈海荣郁建强食用菌-1995年1期草菇废料再栽培双孢蘑菇技术刘克全李素华...中国食用菌-2003年6期草菇高产高效栽培技术王顺利曹伟新疆农业科技-2003年4期草菇高产技术探讨胡昭庚浙江食用菌-1994年4期草菇高产稳产措施钟新文江苏食用菌-1994年6期草菇高产新技术李汉昌中国食用菌-1995年5期草菇高产优质栽培新技术温鲁农业科技通讯-2002年12期草菇高产栽培的主要技术环节余会康农家科技-1999年5期草菇高产栽培技术无农家之友-2005年6期草菇高产栽培技术（连载）李育岳汪麟中国食用菌-1992年1期草菇高产栽培技术措施（二）香永田李明农村科技开发-1992年3期草菇高产栽培技术措施（一）香永田李明农村科技开发-1992年2期草菇高产栽培技术探讨郑宝钳闽东农业科技-1990年3期草菇高产栽培技术研究李明芝[1]连艳鲜[2]...河南农业科学-2002年9期草菇高产栽培技术研究：栽培辅料的选择黄志龙林友照福建热作科技-2000年3期草菇高产栽培技术要领刘俊民王进科中国食用菌-2000年1期草菇高产栽培十法严
泽湘四川农业科技-1998年4期草菇高产栽培实用技术曹德宾[1]曹令花[3]...四川农业科技-2003年6期草菇高产栽培试验徐天宇李传曾山东农业科学-1989年4期草菇高产栽培试验简报王东海食用菌-1997年2期草菇高产栽培谈陈国荣江苏食用菌-1991年3期草菇高产栽培五要素杨大林农业科技通讯-1997年9期草菇高产栽培研究的经济效益分析卫治民王品华江苏食用菌-1993年5期草菇高产栽培主要技术余会康闽东农业科技-1999年3期草菇菇蕾枯萎的原因及预防韩加勤农业知识：瓜果菜-2005年7期草菇间套种栽培技术季文富江苏食用菌-1993年3期草菇简易栽培技术杨大林农村经济与科技-2000年5期草菇金针菇配套周年栽培技术陈建辉农村实用技术-2005年8期草菇菌种生产中常见的杂菌污染及其防治黄爱玲[1]曾志忠[2]...广东农村实用技术-2006年4期草菇颗粒菌种的研制及栽培试验李志生[1]谢宝贵[2]...食用菌-2001年3期草菇快速栽培新法无中国农村小康科技-2003年9期草菇框式高产栽培技术胡美芳[1]吴锡鹏[2]...食用菌-2002年4期草菇两段栽培技术杨大林蔬菜-2004年8期草菇两种培养料的组分在栽培过程中的变化陈超纲莫天砚广西农业大学学报-1993年1期草菇露天栽培陈传林农村科技-1990年8期草菇露天栽培技术李焕如农村科学实验-1999年4期草菇培养料不同发酵处理的栽培效果比较试验曹裕汉曹学文广东农业科学-2003年3期草菇盆播高产栽培技术邹向英曹新红...山东蔬菜-2003年1期草菇屏优一号的特性及栽培技术包著勤食用菌-1993年5期草菇人造种的研制及其配套栽培技术李志生郭建铭福州农业科技-2000年1期草菇生产的改革吴乙城中国食用菌-1993年4
2312
30（12）：2312～2317核农学报2016，
JournalofNuclearAgriculturalSciences
8551（2016）12-2312-06文章编号：1000-
草菇V23子实体耐低温性能改良的初步研究
祝子坪
（
1
2
1
李娜
1
唐雪明
2
浙江台州学院生命科学学院/浙江省植物进化生态学与保护重点实验室，浙江台州318000；
上海市农业科学院生物技术研究所，上海201106）
60
摘
对其原生质体分别进行电子束诱变和Co－γ射线要：为了改良草菇V23子实体耐低温储藏性能，
诱变，用筛选出的耐低温突变体进行基因组重排。经过3轮基因组重排成功选育出1株能正常出菇的
菌株VF；VF遗传稳定，其子实体在10℃条件下储藏期为20h，比原始菌株V23储存期延长了25%。由此可见，用基因组重排技术提高草菇的耐低温性能是可行的。本研究结果为选育对环境耐受的食用菌菌株提供了新的思路。
关键词：草菇；基因组重排技术；原生质体；耐低温菌株
DOI：10.11869/j．issn．100-8551.2016.12．2312Volvariellavolvacea（Bull．exFr．）Sing．］草菇［又称
中国菇，是一种喜湿、喜温的草腐真菌，栽培区域广泛
［1］
题
［11－15］
。基因组重排（genomeshuffling）技术是近几【目前最新草菇保鲜专利】
。草菇鲜食口感较好，以鲜销为主，但常温下其子
年发展起来的微生物育种方法，该技术通过定向进化
技术使菌株的基因组得到随机重排而达到选育目的，具有不需要事先知道供试微生物的遗传背景也可以对其进行遗传育种的突出优点，成为一种极其高效的微生物育种方法
［16］
［2］
实体生理代谢活动旺盛，极易老化。采收的草菇子实
草菇子体急需低温储存。然而在5～10℃低温条件下，实体会变软、自溶液化，以致腐化变质而丧失食用价值，
［3］所以，子实体储存问题是草菇生产的关键制约因素。［4］为了解决草菇子实体储藏问题，吴国虹等研究了不同
。2002年，Zhang等［17］首次用基因
组重排技术提高费氏链霉菌合成泰乐星的能力，取得
了明显的成效。此后，研究者又在多种微生物育种上取得了较好的效果
［18－22］
包装方式对1－MCP处理草菇的保鲜效应，发现打孔PE膜结合托盘包装的贮藏效果较好；叶蕙等［5］研究了γ辐照对草菇保鲜及其生理机制的影响，结果表明，在
一定的范围内，辐照抑制了膜脂过氧化过程，保持了膜结构的完整性，因而延缓了草菇的衰老进程，延长了贮
［6］［7］
藏保鲜期。魏要武等和赵妍等从草菇储藏生理方
。
目前，对草菇遗传背景还缺乏了解，且所筛选到的耐低温草菇菌株多为通过诱变选育得到，但再继续采用常规诱变育种手段则难以获得明显的效果，因此草菇育种应该探索先进的方法。genomeshuffling技术为草菇耐低温菌株的选育提供了先进可行的途径，本研究用genomeshuffling技术选育草菇耐低温菌株，以期提高草菇子实体耐低温能力，解决草菇子实体低温储藏难题。
面研究了储藏过程中酶活性的变化，为储藏条件研究奠
［8］
定了基础；林锋等对草菇育种方法及相关分子标记研
究进展进行了综述，指出草菇遗传育种研究进展缓慢，应该引进先进的技术方法。
草菇生活史复杂，且菌丝间无锁状联合，杂种选择缺乏遗传标记，验以进行常规育种
［9－10］
1
1.1
材料与方法
材料
草菇V23，上海农业科学院食用菌研究所提供；溶
。使用诱变及
转基因方法也未能选育出可用于生产的耐低温理想菌株，草菇不耐低温问题仍然是食用菌界一个难
06-19收稿日期：2015-11-10接受日期：2015-
基金项目：国家自然科学青年基金（31300047）
mail：zhuzp123@sohu．com作者简介：祝子坪，男，讲师，主要从事食品微生物研究。E-通讯作者：同第一作者。
壁酶（lywallzyme），氯购自广东微生物研究所；葡萄糖、
PEG6000等试剂均为分析纯，化钙、购自上海国药试剂公司。
1.2培养基
PDA液体培养基：200g马铃薯沸水中煮15min，8层纱布过滤，滤液中加入20g葡萄糖，补加蒸馏水至1000mL，pH自然。PDA固体培养基：向上述PDA液体培养基中加入1%的琼脂粉后灭菌。PDA再生培养基：PDA液体培养基中加渗透压稳定剂，使其浓度为0.6mo1·L－1，再加1%的琼脂粉。1.3
原生质体诱变及变异菌株筛选
草菇V23原生质体制备和再生方法参考文献
养。在较优的PEG浓度下进行融合剂pH优化试验，pH值分别为6.5、7、7.5、8、8.5、9。PEG融合剂用渗
2+－1
透压稳定剂配制，其中添加Ca（0.01mol·LCaCl2）。根据融合子和灭活亲本的再生情况计算融合
［24］率，原生质体融合率按下式计算：
a=［（b-c）/d］×100%
（1）
a表示原生质体融合率；b表示融合再生平板式中，
的菌落数；c表示灭活亲本再生平板的菌落数；d表示亲本再生平板的菌落数（供融合的双方原生质体较少方）。1.6基因组重排
所有变异菌株的原生质体等量混合后分成相等的2份，一份进行热灭活，另一份进行紫外线灭活。将2份灭活的原生质体混合，在融合剂作用下随机融合，再
32±0.5℃恒温培养3～4d。收生平板培养法再生，
32±集全部再生的融合菌株接种于PDA培养基上，
0.5℃恒温培养1d，然后置于0℃下处理28h，再置于32±0.5℃恒温培养，仍然能生长的菌株为F1重排
每代都进行菌株。将F1重排菌株连续转接培养5代，
28h），低温处理（0℃，到第5代还保持耐低温性且生长速度、菌落外观形态、颜色均无明显变化的菌株为遗
传性稳定的F1基因组重排菌株。之后，将F1重排菌株全部收集，制备原生质体，并按同样方法进行第2轮
0℃条件下处理32h，融合、再生、转接培养，遗传稳定性测定，所得菌株即为第2轮耐低温融合子，即F2重
并排菌株。将F2重排菌株全部收集，制备原生质体，0℃条件下处理36按同样方法进行第3轮融合、再生、
h，转接培养，遗传稳定性测定，所得菌株即为第3轮耐低温融合子，即F3重排菌株。1.7重排菌株子实体耐低温测定
对筛选出的基因组重排菌株进行出菇试验，能正常出菇的菌株采收子实体，随机选10个子实体放在保
［25］鲜袋中于10℃条件下储藏，每间隔2h用HV－10型维氏硬度计（瑞士PＲOCEQ公司）测定子实体硬度、
［23］进行。离心制备原生质体，加渗透压稳定剂调整
7
·mL－1，浓度为1.0×10个取1mL置于2.5mLPE离
心管中密封，采用上海市农业科学院高能电子直线加60
速器及15万居里的钴源辐照装置进行诱变。Co－γ
－1
诱变剂量率为10Gy·min。高能电子直线加速器
（日本IHI公司），每秒能发射10Mev功率为10KW，能量。诱变的草菇原生质体再生后，放置0±0.5℃条4d后件下处理24h，然后在32±0.5℃条件下培养，
选取未冻死且复苏生长较快的菌株接种于PDA平板上，选菌丝较密、生长健壮的菌株为初筛变异菌株。将初筛变异菌株转接4代，每代都进行耐低温试验（0℃，24h），菌落到第4代还保持耐低温性且生长速度、外观形态、颜色均无明显变化的菌株为最终筛选出的变异菌株。
1.4原生质体灭活
合适的灭活条件为草菇V23变异菌株的原生质体致死率刚好为100%的处理条件。热灭活：将变异菌株的原生质体悬液移入无菌试管中，置于50℃恒温水浴中，保温处理3min；紫外线灭活：将变异菌株的原生质体悬液移入直径为6cm的无菌平皿中，置于已预热稳定的30W紫外灯下，垂直距离为30cm，照射105s。1.5
原生质体融合条件优化
将V23原生质体分为2份，一份用紫外线灭活，
质量，计算平均值；并切开观察切面有无水浸现象。当
子实体变软、表面出水、切面出现水浸现象时，表明草菇已失去商品性。
1.8ＲAPD法检测变异菌株
［26］
采用CTAB法提取草菇基因组DNA，采用核酸蛋白测定仪（美国Quawell公司）测定DNA浓度，1.3%琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量。从常用随机引
6
一份用热灭活。从2份中分别取浓度为1.0×10·mL－1灭活原生质体悬液各1.0mL，3000个混合，
r·min－1离心10min，收集原生质体，去除上清液后将原生质体悬浮于0.2mL渗透压稳定剂中，然后加入一
32℃预热的PEG融合剂1.8mL，定浓度、使稀释后的PEG终浓度分别为25%、30%、35%、40%、45%，32℃水浴保温60s后加入5mL渗透压稳定剂终止融合，
并离心洗涤，去除融合剂。洗涤后的原生质体重新悬浮于渗透压稳定剂中，涂布于PDA再生平板再生培
物中挑选扩增效果好、多态性高、稳定较强的引物
GAAACGGGTG对样品进行扩增。反应体系总体积为15μL，1.0μL2.5mmol·L－1包括1.5μL10×Buffer，
90ng模板DNA，0.5dNTPs，1.5μL10μmol·L－1引物，
UDNA聚合酶，最后用双蒸水补至15μL。反应程序
36℃复性1为：94℃预变性2min；94℃变性1min，
min，72℃延伸1min，共40个循环；最后72℃延伸10
min，4℃保存［27］。扩增产物在2.0%琼脂糖凝胶中电泳120min，紫外灯下观察拍照。
2
2.1
结果与分析
诱变及变异菌株的筛选
根据预试验结果，电子束辐照剂量为600Gy，对
60
应的致死率为78.48%；Co－γ射线辐照剂量为750Gy，对应的致死率为79.49%。本研究对草菇V23原
60
始菌株分别用电子束和Co－γ射线进行诱变，诱变的草菇原生质体再生后，经低温筛选和遗传稳定性试
验，筛选出突变菌株，其中从电子束诱变后的变异菌株
60
中筛选出3株，从Co－γ射线诱变后的变异菌株中筛选出4株，组建成突变菌株库。2.2融合条件优化
PEG浓度、pH值对原生质体融合有重要的影响。PEG以分子桥形式在相邻原生质体膜间起中介作用，使
［28］
膜形成一层易于融合的磷酯双分子层区；pH值能影响溶液中分子的带电性质，因此影响原生质体的融合。
图1Fig．1
影响原生质体融合率因素Differentfactorsaffectingthe
efficiencyofprotoplastfusion
pH由图1可知，在试验条件下，随着PEG浓度、值增加，原生质体的融合率均是先增加后降低，在PEG浓度为40%、pH值为7.5的条件下，草菇原生质体融合率最高，达到0.318%。2.3
重排菌株筛选
用7个变异菌株作为基因组重排的出发菌株进行【目前最新草菇保鲜专利】
子实体在10℃低温下储藏
。培，采收子实体，
由图2可知，菌株V23子实体在储藏16h时出现了明显的局部液化，而此时VF子实体性状较好。VF
3轮随机基因组重排，最终筛选出8株耐低温遗传稳
定的重排菌株，每轮筛选到的融合子数及其中的遗传稳定的耐低温融合子数见表1。
表1Table1
筛选得到的遗传稳定的耐低温融合子Low-temperaturetoleranceoffusants
ofgeneticstability
代数Generation
F1F2F3
融合子数遗传稳定融合子数
FusedprotoplastnumberSelectedfusedprotoplastnumber
25118493
37238
2.4
重排菌株子实体低温储藏性状
对遗传稳定性较好的8个菌株进行栽培试验，其
图2
Fig．2
影响原生质体融合率因素ofprotoplastfusion
Differentfactorsaffectingtheefficiency
中有1株能正常出菇，标注为VF。对VF
菌株进行栽
子实体局部液化出现在储藏20h时，比V23储藏期延长了4h。由图3可知，在低温储藏时草菇子实体硬度和质量都会下降，这可能是由于低温胁迫造成草菇子实体细胞膜损伤所致，因此硬度和质量变化能反映草
菇子实体耐低温胁迫能力。VF菌株硬度和质量下降
的幅度明显比V23小，可见其耐低温胁迫能力较V23有所提高
。
图3
Fig．3
子实体硬度和质量随储藏时间的变化
Thechangeoftherigidityandthemassofthefruitingbodywiththestoragetime
2.5重排菌株鉴定
用所选引物分别对V23和VF进行PCＲ扩增。
VF扩增条带和V23扩增条带存在明显差由图4可知，
异，VF与V23相比扩增出2条特异性带，这2条带之
1条在1500bp附近。表明中1条在2000bp附近，
菌株VF的基因组有别于原来的亲本株V23
。
因表达，推测草菇耐低温表型由多个微小基因决定，属
于复杂的数量性状遗传。由于草菇耐低温性状涉及的基因数量多，每个基因对表型的影响比较小，因此传统的育种方法很难大幅度提高草菇菌株的耐低温性，这给耐低温菌株的选育带来了困难，因此至今尚未选育出生产上实用的草菇耐低温菌种，需要寻求新的方法选育草菇耐低温菌种。
本试验出发材料为草菇的菌丝体，亲本优良性状相对稳定且容易培养，去除细胞壁的原生质体对外界环境十分敏感，经诱变剂处理后易发生突变，容易获得
［30］
突变株。每种诱变剂都有自身特有的诱变机理，
60
Co－γ射线可诱导DNA的甲基化而使基因发生变
［31－33］
。在异，电子束可使DNA双链断裂而产生变异
DNA的损伤程度和损伤位点具有相诱变剂量固定时，
对的稳定性，因此基因突变位点具有相对稳定性。本研究采用2种不同的诱变方式，具有较宽的变异谱，尽可能使草菇耐低温相关的多基因发生突变，然后用genomeshuffling技术使耐低温突变基因进行高度集中，选育出的菌株比出发菌株耐低温性明显提高，为今
图4
Fig．4
ＲAPD电泳图谱
后草菇菌株性状的进一步改良提供了思路。
ＲAPDprofilesoftheshuffledandparentalstrains
4结论
3讨论
低温可以抑制果蔬呼吸代谢，延长储藏期。但是
以草菇菌株V23为材料，通过酶解菌丝方法制备原生质体。用600Gy电子束辐照剂量诱变原生质体，筛选出3株耐低温变异菌株；用750Gy
60
Co－γ射线
草菇的子实体却在低温下自溶液化，很快丧失食用价值。孙晓红等
［29］
研究发现草菇在低温诱导下有多基
辐照诱变原生质体，筛选出4株耐低温变异菌株，将2
次筛选出的变异菌株组建成突变菌株库。在PEG浓
pH值为7.5的条件下对突变菌株库进行3度为40%、
轮随机基因组重排，最终筛选出8株耐低温且遗传稳定的重排菌株。其中一株VF能正常出菇，其子实体在10℃条件下储藏期为20h，比原始菌株V23储存期延长了4h。由此可见，用基因组重排技术提高草菇的耐低温性能是有效可行的。参考文献：
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枣庄市食用菌技术研究所
食用菌技术培训 食用菌栽培技术 食用菌菌种 食用菌物资 食用菌全自动机械
山东枣庄食用菌技术研究所教您了解食用菌草菇种植的技术培训
山东枣庄食用菌技术研究简介所长吴敬芹从一个种菇大王，发展了菌种场,研究所,菌菜加工科技开发有限公司,走上了高新技术园区的领导岗位，带领更多的家庭发展经济，并使枣庄市食用菌研究所健康快速的发展。
公司技术园是国内规模较大的高新技术园区之一，有经验丰富的科研教学队伍，生产场、试验场、种植基地和示范村。已形成产、供、销一体化。大量产品出口日本、韩国、澳大利亚、鲜品空运香港 、深圳、在广东、上海设有办事处。先后接受原国家计生委主任彭佩云，原山东省委书记姜春云等国家领导人的视察。吴敬芹是市人大代表，政协委员，20年来致力于食用菌的开发与研究，科研成果十几项，曾荣誉全国先进女能手，省劳动模范，扶贫标兵，科技大王，国内专业技术人员荣誉称号。她的事迹、论文及灵芝盆景作品曾被国家几十家媒体重点报道，被编入中华巾帼大典，山东省人民广播电台特邀她主持应答一部专家热线电话0632-7011228。在农村百事通2000年第三期作封面人物“能人谈经”及中国农业科学院主办的农业科技通讯2002年第11期人物风采栏目报道了“食用菌的领头雁”，“人大代表的风采”影响极大，在国内食用菌界享有较高的知名度，镇长勤题金字：“仙泉食用菌”，以此来鼓励她将最先进的技术优质的菌种，好的产品，推向社会。仙泉无公害蔬菜通过农业部注册。仙泉食用菌的诞生，充分体现了领导与群众的信任，标志着我园进入了新的里程碑。2002年仙泉食用菌研究所被授予中国农林科学院，食用菌良种培育示范基地，被山东省科技厅，科技信息报评为星火科技示范基地，枣庄食用菌科普示范基地。镇党员电教科技工程，珍稀食用菌示范基地，技术推广中心，又成立了仙泉食用菌研究所，天麻，虫草研究协会。在此基础上，通过市科技局申批，2000年6月正式成立枣庄市食用菌研究所,下设品种繁育培植中心，研发培训中心。
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多次承担省市级菌用菌科研项目，食用菌全营养加工保鲜，及其产业化开发食用菌系列产品开发玉珍的研究开发通过有关部门鉴定获得成功自主知识产权科研成果的十几项，国家专利六项先后成功引进了开发出金针菇、猴头菇、双孢菇、白灵菇、杏鲍菇、玉珍菇、蟹味菇、虫草、天麻、灵芝等，七十多个花色品种，2003年组办成枣庄食用菌协会，2007年2月成立枣庄市食用菌合作社，近年来为国内外工厂化生产企业，提供及培训大量的计术人员。 草菇种植的技术培训
草菇可室内栽培、室外栽培两种。草菇室内栽培可在专门搭建的草菇泡沫房进行，亦可利用闲置的农舍、猪舍等改建而成的菇房进行，改建的菇房可搭床架，亦可直接在地面栽培。 但目前草菇一般室内（泡沫房）生产为主。所以我们只介绍在室内草菇栽培技术： 草菇泡沫房：
(1）构造：木架框架，用2.5～5厘米厚的聚苯乙烯泡沫板作为菇房的墙壁和房顶，墙壁和房顶的内层再衬以聚乙烯薄膜。房内地面铺水泥，并设有瓦管道。
（2）规格: 棚长4米，宽2.5米，侧高2.4米，顶高2.7米，人字形屋顶，盖油毡纸，用木条压实 ，前后开门，菇房两端各设置 0.3～0.4米见方的对流通风窗两个。。室内栽培床架靠两侧，但不紧靠泡沫板墙，中间为走道床架分层，架宽0.8M，过道0.65M，4～6层，层高0.5M（底层离地面0.30M）， 地面瓦管道：
先铺一张高温高压大棚膜在挖好的槽内，隔离泥地的水汽，再铺一层煤渣隔热，
最后铺上瓦
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管道。
3、栽培季节
草菇属喜高温高湿、草腐性菇类。最佳菌丝生长温度28～35℃，最佳出菇温度30～35℃，在广西5月～10月均可进行夏季栽培。若采用加温设备，可进行周年生产。目前我区大多数是利用泡沫房周年栽培的。
4、原料配比
试验表明，原材料较为理想的配比应是：
（1）药渣65％、废棉30％、稻草10％，石灰粉5％ （2）稻草60％，废棉35％，石灰粉5％
（3）稻草（切碎）80％， 牛粪 15％，石灰 5％， PH值 9～10。 （4）破子棉95％，石灰粉5％; 以上原料配方 PH值 9～10。
5 、 栽培工艺流程：
原料准备→浸料→堆制发酵→上床铺料→二次发酵→播种→菌丝期管理→出菇期管理→采收→清料、打扫菇房。 6、原料处理：
（l）以稻草为主原料
将稻草切成5～10厘米长。切碎的稻草用石灰水浸泡，每100千克稻草用5千克石灰，浸泡6小时后捞起沥干，拌入石膏、牛粪、等建堆发酵。堆制5天后，中间翻堆1次，稻草堆制发酵时，一般堆宽1.2米，堆高1米，长度1米以上，堆中要适当穿通气孔。堆制好后，要盖薄膜保湿，同时防止害虫侵入。堆制好的培养料要质地柔软，含水量 70％，PH值调至10左右。
（2 ）以废棉渣或棉籽壳为主原料
将废棉渣浸入石灰水中，每100千克废棉渣加石灰5千克，浸透后捞起做堆，盖上薄膜发酵 2天左右。含水量 70％左右(用于抓料，指缝有少量水滴出) 即可搬入菇房。进房前若PH值加适量石灰调至9 ～10左右。
（3）以中药渣为主原料
中药厂运来后拌3%左右石灰直接使用或堆制2天左右再用 7、适时上架：
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（1）以废棉或破子棉为主的：
原料发酵好后，即可上架。培养料入房前床架可先铺1层纱网，使培养料不易跌漏，把预堆好原料拌匀，含水量控制在70％－75％(手用力握料有水滴而不下滴)，铺平、稍压，然后铺1层薄薄的废棉。床架铺料以每平方米8－10公斤，厚约10厘米为宜。 （2）以稻草为主的：
床架铺料料厚20厘米左右。
（3）以中药渣或稻草与废棉混合为主的：
稻草和中药渣均铺在底层，上面覆盖废棉。
5、按料播种：
二次发酵后必须驱散尽一氧化碳，待料温36℃－38℃，室温34℃－35℃，料含水量65％即可进行播种。播种量为每平米用种1～1.5瓶，这样，在播种前应选优质无杂菌种，将菌种挖出扳碎如黄豆大小，然后进行点播或均匀撒播在培养料的表面，并使种和料充分接触，然后用薄膜重新覆盖
6、菌丝期管理
薄膜在覆盖1－2天后观察菌丝的生长情况，草菇发菌期一般为4天，这期间菇房应维持34℃－35℃，培养料的温度不要高于40℃。在发菌期间不需要特别的光照和水分，可以有微量的通风。第5－6天，当菌丝发透至床底，可开窗通风透光，直至料面干爽，使温度调至30℃左右，此时可重喷压菌水，至料层底部有水珠渗出为止，使菌丝充分向培养料生长，压抑浮面菌丝。子实体原基的发生与发育需要较低的相对湿度(80％)和温度(28℃－30℃)，以及散射光的刺激，都可促进子实体形成。所以，在第7－8天，通风要适当加大，光照不足可增设日光灯。从子实体萌发到草菇上市，一般需要4－5天，这几天当中，菇体生长需大量的水分和氧气，而温度又必须保持在30℃－32℃，所以，当料面太干、空气湿度低于80％的情况下，应当雾状向空间喷水，以增大湿度，但不可以过量，过量则会使小菇蕾窒息而萎缩，从而降低产量。
8、采收：
当草菇菇体质地较硬，菇体呈圆锥形时即可采摘。采摘时，最好一手按住草菇着生基部，另一手将成熟的草菇拧转摘起，不能像拔草一样向上用力拔，这样会使周围的培养料松动，影响其他菇的生长。若是丛生菇，最好等大部分可摘时一并采收，或用小刀将可收的菇切下。采收后菇应及时用刀切去基部的杂质，并按等级分好，分别包装。 9、主要病虫害防治： ①青绿霉。
用多菌灵、石灰粉直接撒在发病的位置，发病严重的则把病部培养料挖出，然后在挖掉位置的边缘撒上石灰或多菌灵，以防蔓延。
②霉菌
主要是室内空气湿度过大和培养料含水量过高而引起，预防以通风为主，一旦发生，则必须挖掉病变的培养料，再在挖去的边缘撒上石灰粉。
③虫害。
主要以螨类和菇蚊、菇蝇为多，最好是在堆料时加入一定浓度的敌百虫进行预防，当料进房后，在重淋压菌水时也可以进行施药，之后就不可以喷到培养料上，只能在地面和墙壁
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上喷施。